Первая деревянная церковь Успения Пресвятой Богородицы была построена между 1764 и 1766 годами как храм третьего пограничного батальона. В 1777 году она была разобрана, а её материалы использованы при ремонте Казанской церкви.
Во второй половине XIX века было принято решение о возведении нового храма в честь 25-летия царствования императора Александра II. Средства на строительство были пожертвованы купцом Ильёй Степановичем Шушпановым и его сыном Гавриилом Ильичом Шушпановым. Закладка храма состоялась 27 июня 1880 года. Строительство велось под надзором архитекторов В. И. Якунина и Н. М. Соколова. Освящение храма произошло в начале декабря 1889 года.
Архитектурно храм был выполнен в традициях позднего классицизма с элементами русского стиля. Он имел пять куполов и двухъярусную колокольню. Главный престол был освящён в честь Успения Пресвятой Богородицы, правый придел — во имя Архангела Гавриила, левый — в честь Анны Пророчицы. Интерьер украшали росписи, иконостас был отделан мозаикой. В храме хранилась икона, посвящённая спасению императора Александра III в железнодорожной катастрофе 17 октября 1888 года. В 1902 году при храме была основана церковно-приходская школа.
В 1928 году храм был передан старообрядческой общине. В 1930-х годах он был закрыт и снесён. На его месте был построен жилой дом для сотрудников Ростовского государственного университета. Здание церковно-приходской школы сохранилось до наших дней в перестроенном виде.
В 2012 году, в ходе реконструкции улицы Максима Горького, на месте бывшего кладбища Успенской церкви были обнаружены два захоронения. Предполагается, что они могли принадлежать основателю храма Гавриилу Ильичу Шушпанову и его супруге.
