Храм Успения Пресвятой Богородицы в деревне Николо-Рожок был возведен в 1765–1768 годах на месте двух обветшавших деревянных церквей, ранее принадлежавших упраздненному Николо-Рожковскому мужскому монастырю. Монастырь, основанный в XV веке на землях князя Константина Дмитриевича, сына Дмитрия Донского, прекратил существование после литовского разорения. В 1763 году прихожане подали прошение в Тверскую духовную консисторию о строительстве новой каменной церкви.
Храм выполнен в традициях архитектуры XVII века с элементами барокко. Основу композиции составляет двусветный четверик, перекрытый сомкнутым сводом и увенчанный пятиглавием. С востока к нему примыкает граненая апсида, с запада — трапезная с двумя приделами: Никольским и Нила Столобенского. Четверик завершен двумя рядами кокошников, а барабаны глав украшены аркатурно-колончатыми поясами. В 1770-х годах рядом была построена отдельно стоящая колокольня в стиле барокко.
В 1859–1863 годах храм был расширен: добавлен северный придел во имя преподобного Нила Столобенского, а также притворы с юга и запада. В 1861 году придел освятил благочинный протоиерей Осташковского собора. Иконы для иконостаса написал осташковский художник Иван Митин. В 1851 году четверик храма был расписан ржевским художником Петром Зуевым.
В советский период храм был закрыт, интерьер утрачен, частично сохранилась лишь настенная роспись. В 1970-е годы проведена частичная реставрация фасадов. Богослужения возобновлены в постсоветский период. В настоящее время храм является действующим и относится к Тверской епархии Русской Православной Церкви.