Храм Вознесения Господня в Ростове-на-Дону был построен в 1910-1913 годах на территории Братского кладбища. Строительство осуществлялось на средства купцов Герасимова, Мясникова и Сафонова по проекту архитектора Григория Васильева. Главный престол храма освящен в честь Вознесения Господня, боковые приделы - во имя святых Адриана и Наталии и апостола Иоанна Богослова.
Братское кладбище, где расположен храм, было основано в 1892 году после эпидемии холеры. Первоначально для строительства храма использовались материалы временной каменной церкви, возведенной на Новой Базарной площади при строительстве Александро-Невского собора. После завершения собора временную церковь разобрали, а материалы перевезли на Братское кладбище.
В 1929 году храм был закрыт и использовался как склад для спортивного общества "Динамо". В 1933 году, после обращения верующих, храм ненадолго открыли, но в 1937 году снова закрыли. В 1930-1940-х годах были разрушены колокольня и купол храма. Во время немецкой оккупации в 1942 году храм вновь начал действовать. Официальное открытие состоялось в 1946 году, после чего богослужения не прекращались.
В конце 1990-х годов проведены восстановительные работы, в ходе которых воссозданы колокольня и купол. Во второй половине 2000-х годов осуществлена реконструкция интерьера храма. Архитектура храма сочетает элементы неовизантийского стиля и русского стиля. Первоначально храм имел одну большую главу и четыре малые, фасады были украшены кирпичным декором.