Храм преподобного Серафима Саровского в Ростове-на-Дону был заложен в 1904 году в станице Гниловской. Инициатива строительства принадлежала причту Свято-Троицкого храма, обратившемуся в 1899 году к архиепископу Донскому и Новочеркасскому Афанасию с прошением о разрешении возведения новой церкви. Проект однопрестольного храма в стиле московской школы середины XVII века разработал ростовский архитектор Козлов. 22 марта 1906 года проект получил благословение архиепископа Афанасия, после чего началось строительство.
Основные работы завершились к октябрю 1911 года. 4 декабря того же года благочинный Аксайского округа протоиерей Александр Григорьев совершил чин освящения храма. В феврале 1912 года Святейший Синод учредил при храме самостоятельный приход. В 1922 году из церкви изъяли ценности под предлогом помощи голодающим Поволжья. В 1938 году храм закрыли, переоборудовав под кинотеатр с демонтажом куполов и звонницы.
В период немецкой оккупации 1942-1943 годов богослужения временно возобновились. Окончательное закрытие произошло в 1959 году, когда здание передали музыкальной школе имени Глинки. В 1992 году началось движение за возвращение храма верующим. К 1995 году приход возобновил деятельность, а к 2004 году завершилась реконструкция храма с освящением архиерейским чином.
Архитектурный облик храма соответствует традициям русского стиля XVII века. Первоначальное здание имело пять куполов и шатровую звонницу. В интерьере сохранялись элементы художественной отделки начала XX века. В ходе реконструкции 1990-2000-х годов исторический облик был восстановлен с сохранением планировочных решений и декоративных элементов.