Первое упоминание о храме в селе Пушкино относится к 1601 году. В 1629 году деревянная церковь Успения сгорела в результате большого пожара. В 1634 году храм был вновь выстроен, а в 1647 году обновлён.
В 1766 году на средства прихожан и местного помещика поручика И. И. Давыдова началось строительство каменного храма, которое завершилось в 1769 году. Архитектурно храм представлял собой типичный образец стиля «восьмерик на четверике» с пятигранной апсидой и двухъярусной колокольней.
В 1889 году по проекту архитектора Д. Д. Зверева храм был перестроен. В ходе реконструкции были добавлены новые архитектурные элементы, что придало зданию черты эклектики. Фасады были украшены плоскостным декором, пилястрами и рамочными наличниками с клинчатыми замковыми камнями.
В 1867—1869 годах была построена новая трапезная с приделами Архангела Михаила и Богоявления. В 1902—1907 годах возведена новая колокольня по проекту архитектора В. И. Назарина, взявшего за образец колокольню Спасской церкви в Бежецке.
В 1930-е годы, в период антирелигиозной политики, храм был закрыт. Здание использовалось под хозяйственные нужды, что привело к утрате многих элементов внутреннего убранства и архитектурных деталей.
В 1992 году храм был возвращён Русской Православной Церкви. Начались восстановительные работы, направленные на реставрацию утраченных элементов и возобновление богослужебной деятельности. К 2007 году регулярные службы были возобновлены.
